■ 產(chǎn)品介紹
Y190菌株是Clontech公司開發(fā)的GAL4系統(tǒng)酵母雙雜實驗用菌株，MATa型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATα型酵母菌株Y187通過mating操作進行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker為: trp1，leu2，cyh2；報告基因為：lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母雙雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：(pGB和pACT2)或（pGBKT7和pGADT7）。質(zhì)粒pGB由pGBKT7改造而來，篩選標(biāo)志為TRP1，用于表達DNA-BD(來自酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4N端1~174位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Bait)的融合蛋白；質(zhì)粒pACT2與pGADT7的結(jié)構(gòu)和功能類似，篩選標(biāo)志為LEU，用于表達AD(GAL4 C端768~881位氨基酸)與目標(biāo)蛋白 (Prey)的融合蛋白。GAL4系統(tǒng)原理：一個完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4可分為功能上相互獨立的兩個結(jié)構(gòu)域：位于N端1~174位氨基酸區(qū)段的DNA結(jié)合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并與之結(jié)合。而AD可以啟動UAS下游的基因進行轉(zhuǎn)錄。BD和AD單獨存在不能激活轉(zhuǎn)錄，但當(dāng)二者接近時，則呈現(xiàn)完整的GAL4活性，使含有UAS的啟動子下游基因轉(zhuǎn)錄表達。正常條件下，BD不與AD結(jié)合，將要檢測的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合，形成 bait融合蛋白(bait–BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey發(fā)生相互作用，就會促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，從而激活報告基因的轉(zhuǎn)錄。 |
基因型： | MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1 UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ |
■ 基本信息
培養(yǎng)基: | YPD/YPDA |
菌株類別: | 酵母菌 |
培養(yǎng)條件: | 28℃，有氧，YPD/YPDA |
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化: | 化轉(zhuǎn)/電轉(zhuǎn) |
保存方式: | 30%甘油，-80℃ |
基本應(yīng)用: | 酵母雙雜交 |
■ 使用方法
收到菌液及時四區(qū)劃線活化，挑取單克隆在YPD中培養(yǎng)到生長對數(shù)中后期加入終濃度30%無菌甘油保種，分裝置于-80℃保存，避免反復(fù)化凍。建議超凈臺內(nèi)劃線涂板，避免雜菌污染。
■ 注意事項
1. 酵母菌在YPD培養(yǎng)基上會變粉，是正常現(xiàn)象，可以由此特性鑒別是否為酵母菌。
2. 酵母菌種化凍1-2次活性下降，不建議直接長期保存。
3. 活化保種的種管建議分裝保存，反復(fù)凍融菌株活力下降。
4. 本產(chǎn)品僅可用于實驗室研究，不能用于動物，人體以及作為食品添加劑等用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿 實驗服并戴一次性手套操作。
