產(chǎn)品說(shuō)明:
本產(chǎn)品主要用于釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。PEG/LiAC 有利于酵母細(xì)胞吸收質(zhì)粒DNA，從而提高酵母的轉(zhuǎn)化效率。
使用方法:
1.5mL體系：
1. 在含有約100ng質(zhì)粒的1.5mL無(wú)菌離心管中，加入5uL預(yù)變性的 Carrier DNA，50uL酵母感受態(tài)細(xì)胞，500uL LiAc/PEG3350混合液輕柔混勻。
2. 30℃水浴30 min，每10 min 混勻一次。
3. 每管加入20 uL DMSO，輕柔混勻。
4. 42℃水浴熱激15 min，每5 min上下顛倒混勻一次。
5. 700 g離心5min。
6. 棄掉上清，用1 ml YPD Plus液體培養(yǎng)基重新懸浮，30℃搖床震蕩培養(yǎng)30-60min。
7. 700 g 離心5min。加入0.5mL無(wú)菌0.9%NaCl重懸菌體。
8. 涂布于相應(yīng)的缺陷型培養(yǎng)基上。
9. 30℃恒溫培養(yǎng)3-5天。
15mL體系：
1. 在含有約5-15ug質(zhì)粒的15mL無(wú)菌離心管中，加入20uL預(yù)變性的 Carrier DNA，600uL酵母感受態(tài)細(xì)胞，2.5mLLiAc/PEG3350混合液輕柔混勻。
2. 30℃水浴 45 min，每10 min 混勻一次。
3. 每管加入160uL DMSO，輕柔混勻。
4. 42℃水浴熱激20 min，每5 min 上下顛倒混勻一次。
5. 700 g 離心5min。
6. 棄掉上清，用3 ml YPD Plus 液體培養(yǎng)基重新懸浮，30℃搖床震蕩培養(yǎng)90min。
7. 700 g 離心5min。加入15mL無(wú)菌0.9%NaCl重懸菌體。
8. 分別稀釋10倍，100倍后涂布于相應(yīng)的缺陷型培養(yǎng)基上。
9. 30℃恒溫培養(yǎng)3-5天。
注意事項(xiàng):
1. 注意無(wú)菌操作，避免微生物污染。
2. 酵母制備過(guò)程中盡量在冰上操作，以提高感受態(tài)的轉(zhuǎn)化效率。
